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細胞從培養(yǎng)皿上的解離

更新時間:2023-02-22      點擊次數(shù):930
  以下通用步驟可以在保持細胞完整性的同時從培養(yǎng)器皿中分離多種細胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細胞系。應(yīng)通過實驗來確定不同體系所需的佳條件和濃度。
 
  ?在傳代培養(yǎng)時監(jiān)測細胞存活率。
 
  ?細胞存活率應(yīng)大于90%。
 
  ?對于無血清培養(yǎng)基,建議降低胰酶用量。
 
  1.去除器皿中原有細胞培養(yǎng)基。
 
  2.用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細胞。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與細胞相對的一側(cè)。搖動培養(yǎng)瓶1-2分鐘以沖洗細胞層,然后倒掉清洗溶液。
 
  3.在培養(yǎng)瓶中與細胞相對的一側(cè)以2-3ml/25cm2的比例加入選定的解離溶液(見下表)。確保解離溶液能夠覆蓋整個細胞層。在37℃下孵育培養(yǎng)瓶。并輕輕搖動。通常細胞在5-15分鐘內(nèi)解離。不同細胞系的解離時間有所不同。仔細觀測解離過程,以免損傷細胞。對于難從基質(zhì)上解離下來的細胞系,可以輕敲培養(yǎng)瓶以加快解離過程。
 
  4.當(dāng)細胞解離時,豎直放置培養(yǎng)瓶使細胞流向培養(yǎng)瓶底部。向培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)基。反復(fù)吹吸單層表面以分散細胞。計算細胞個數(shù),然后傳代培養(yǎng)細胞。
 
  注意:如果使用無血清培養(yǎng)基,應(yīng)加入大豆胰酶抑制劑。對于0.25mg/ml的胰酶抑制劑,一般按1:1(體積比)的比例加入即可抑制胰酶。細胞
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